聚合酶链反应是用于在试管中快速“克隆”特定DNA(而不是在大肠杆菌等活细胞中的特定DNA的技术。由于这种过程,即使最初存在于含有许多不同DNA分子的混合物中,也可以制备单个DNA分子的几乎无限拷贝。

程序,流程

  • 为了进行PCR,您必须至少知道您希望复制的DNA分子的序列的至少一部分。
  • 然后你必须合成底漆:短寡核苷酸(含有约2种核苷酸),其与您希望放大的DNA的每条股线的3'末端的序列精确互补。
  • 加热DNA样品以将其股线分离并与引物混合。
  • 如果引物在DNA中发现它们的互补序列,它们与它们绑定。
  • 合成使用原始股线作为模板开始(如始终为5' - > 3')。
  • 反应混合物必须含有
    • 所有四个脱氧核苷酸三磷酸(DATP,DCTP,DGTP,DTTP)
    • DNA聚合酶。它有助于使用不通过分离DNA链所需的高温变性的DNA聚合酶。
  • 持续聚合直至每个新合成的股线已经足够远,以含有所承认的网站其他底漆
  • 现在,您有两个与原始分子相同的DNA分子。
  • 你服用这两个分子,加热它们以分离它们的股线,并重复该过程。
  • 每个循环加倍DNA分子的数量。使用自动化设备,每个复制循环都可以在不到5分钟内完成。30次循环后,作为单一分子DNA的开始被扩增成超过10亿份(230.= 1.02 x 109.)。
读:
核酸:DNA和RNA

利用PCR,通常可以从单个毛囊中扩增足够的DNA,用于DNA键入。一些工人已从单一的精子细胞成功扩增DNA。PCR技术甚至可以从以前的多年来的组织的显微镜载玻片分析DNA。然而,PCR的良敏感性使外来DNA污染成为恒定的问题。

补充阅读

Mullis,K。B.,“聚合酶链反应的异常起源”,科学的美国人,1990年4月。作者讲述了他如何制定PCR的原则(这赢得了诺贝尔奖),同时在晚上驾驶到加利福尼亚山脉的周末休息。

引用本文:William Anderson(Schoolworkhelper编辑组),“聚合酶链反应(PCR):克隆DNA在试管中,”学校努力,2019年,//www.chadjarvis.com/the-polymerase-chain-re aeaction-pcr-cloning-dna-in-the-test-tube/

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