转型PVIB实验室答案

介绍

细菌细胞的转化是一个有用的实验，有助于理解质粒DNA的转化。这个实验涉及四种不同的琼脂平板上的细菌细胞。实验条件为:1个培养皿中有质粒，1个培养皿中没有质粒，1个培养皿中有氨苄青霉素和质粒，1个培养皿中有氨苄青霉素和质粒，1个培养皿中有氨苄青霉素和质粒。然后通过分析产生的菌落数量来确定转化效果。

转化是将外国DNA引入，在该实验中通过质粒，进入细菌细胞。转化对分子生物学至关重要，并且该实验的可观察结果是转型有效性的证据。由于细菌，大肠杆菌不是天然富集的细胞，即必须将大肠杆菌细胞和PVIB质粒与氯化钙混合。然后，该溶液必须在42度下在水中进行热冲击以产生选秀并将质粒扫入细菌膜的孔中。

在制备两个细菌细胞之后，制备一个具有质粒的细菌细胞和一个没有质粒，制备另一个琼脂平板，其中引入氨苄青霉素。氨苄西林是众所周知的一种抗生素，即治疗细菌感染，在这种实验中，氨苄青霉素的作用是杀死所有没有经历转化的细菌。本实验室的目的是制定理解并欣赏转型结果，并侧重于氨苄青霉素对PVIB质粒的影响。

材料:

• 2无菌15ml管
• 4个无菌移液管
• 3 - 4玻璃珠
• 4个无菌转移环
• 2磅琼脂板
• 2 LB琼脂平板与氨苄青霉素
• PVIB质粒
• 500μlcack₂
• LB肉汤
• 烧杯42度水
• 烧杯装满了冰
• 垃圾烧杯

观察和结果

表1.0：结果

LB-plasmid 预测:草坪 原因：细菌将对柳叶乳肉汤排行 观测结果:草坪	LB +质粒 预言：草地 原因：和图1一样 观察结果：草地
LB / amp-质粒 预言：没有增长 原因：氨苄青霉素杀死细菌 观察结果：没有增长	LB / AMP +质粒 预言：孤立的殖民地 原因：选择那些携带质粒的 观察结果：2个殖民地

LB +质粒（阳性对照） - 草坪

LB-质粒（阳性对照） - 草坪

LB / AMP +质粒（实验） - 2个菌落

LB/ amp质粒(阴性对照)-无生长

分析和结论

我的观察结果(上面列出的)与我的预测非常准确。正如预期的那样，由于氨苄青霉素杀死了细菌细胞，并且没有表达抗性的质粒，LB/ amp -质粒没有生长。如我所料，我和我的小组观察了LB/Amp+质粒中的两个分离菌落，最后，LB质粒和LB+质粒显示了草坪菌落生长。

LB +质粒和LB质粒板都显示出草坪菌落。这些结果告诉我们，实验有效地进行，因为细菌能够排列水肉汤。此外，由于没有氨苄青霉素存在，因此细菌的主要生长是因为细菌复制而不被其他因素摧毁。

LB / amp-质粒和LB-质粒具有彼此对比的结果。由于氨苄西林杀死细菌，LB / amp-polasmid显示出没有增长。然而，LB-质粒显示出草坪生长，因为没有氨苄青霉素存在。这些结果清楚地表明了氨苄青霉素在细菌细胞中存在的重大影响。

LB / AMP +质粒和LB / AMP-质粒也显示出对比的结果。虽然LB / amp-质粒显示出没有生长的迹象，但LB / AMP +质粒呈现出分离的菌落。这是因为占据质粒的细菌能够承受氨苄青霉素。来自实验的这种数据显示，通过质粒转化的过程非常有效。LB / AMP +质粒和LB +质粒结果都显示出生长的迹象，但它们过于差异。

LB / AMP +质粒显示出孤立的菌落，因为只有含有质粒的细菌才能发出。然而，LB +质粒显示出草坪生长，因为细菌能够有效地将LURIA肉汤系在一起。这些结果表明，如果实验完整，氨苄西林只会产生影响。

在这个实验中，我们选择了当细菌获得质粒时发生的荧光。为了确定质粒是否有效，我和我的团队被带到一个黑暗的壁橱里，在那里我们观察了平板，看它是否会发出荧光。荧光表明细菌存活并获得了质粒，因此，由于我们有两个分离的菌落，我们有效地进行了实验。菌落的表型是它们被有效转化的证据。

荧光显示细菌已侵染质粒。我首先要检查的是LB/Amp+质粒，以确定转化成功。这是因为要使转化有效进行，外来DNA必须通过质粒插入细菌细胞。显然，人们不会去看带有-质粒的盘子，所以只剩下LB+质粒和LB/Amp+质粒。

LB / AMP +质粒将是更好的选择，因为氨苄青霉素将杀死质粒未占用的所有细菌。因此，如果转变成功，平板将仅发荧光。

总质量=体积x浓度

质粒x 0.0005 μg/μL

250μl1b+250μlcac₂+ 10 μL质粒DNA

=510μL细胞悬浮液

体积悬浮液涂抹/总体积悬浮=分数差

100μL细胞悬浮液/510μl总悬浮液

= 0.196（分数差）

质粒总质量×分数扩散=质粒DNA扩散

0.05μg质粒x 0.196

= 0.0098μg

菌落观察/质粒质量扩散=转化效率

2菌落/ 0.0098 μg质粒

= 2.041x 10.²菌落/μg质粒

我认为影响改造效率的因素是多方面的。我认为最重要的因素是热休克的完成。如果热休克不正确，那么质粒将无法进入细菌细胞，因此转化将无法发生。为了使热休克能正常进行，温度不能过高或过低，因为这会影响质粒进入细菌孔隙的速率。

在该实验中重要的另一个因素是大肠杆菌和pVIB质粒转移到不同的平板上。如果转移的金额太多或太少，甚至可能不会发生转换。对这个实验的效率起主要作用的最后一个因素是培养皿的温度。培养皿必须在30度的温度下培养，即使温度只有几度，细菌也不能发出荧光。如果发生这种情况，我们的数据将是错误的，因为我们将无法计算殖民地的总数。